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RobertoR
Registrado em: 16.01.2009(Sex)22:12 Mensagens: 221 Localização: Curitiba (PR)
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 RAPD-PCR
Hum, onde que posto este tópico, heheh!
Algum biológo do fórum já usou RAPD-PCR (ou tecnicas similarmente baratinhas) para identificar plántas carnívoras? Estou meio curioso de ver o que dá, e posso comprar os óligos. Brigado :) Roberto
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22.12.2009(Ter)22:11 |
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Northon Bruno
Destaque
Registrado em: 03.11.2009(Ter)9:29 Mensagens: 646 Localização: Belo Horizonte
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eu já trabalhei em um laboratorio de pesquisa de parazitologia molecular... mas para fazer um PCR comum precisa-se de varios primers que são caros e importados, precisa de uma centriguga, e uma cuba para correr seu gel, esse gel é barato e facil de fazer pode ser de agarose ou poliacrilamida... Mas antes de tudo vc precisa de extrair o DNA que precisa de outra tecnica, se quiser eu procuro aqui e te falo o que precisa... AH e vc precisa de uma pipeta que mede microlitros que é carissima...
VC terá que conhecer a sequencia de DNA que vc quer trabalhar para fazer comparações com as demais amostras... Seria muito mais viavel vc encontrar um laboratório em que vc pudesse fazer essas coisas como um projeto de iniciação cientifica ou até um mestrado ou doutorado...
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23.12.2009(Qua)9:00 |
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RobertoR
Registrado em: 16.01.2009(Sex)22:12 Mensagens: 221 Localização: Curitiba (PR)
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Olá Northon, pelos equipamentos não tem problema, sou pesquisador mesmo (mas estudo humanos, não plantas). A quantidade de insumos (dNTPs, Taq, agarose) que se usa é tão pouca que não teria problema. Só preciso bancar os óligos, isto sim, mas o custo é em cerca de R$ 1,70 por base, não é aquele custão não. Tenho baixado até artigos sobre RAPD-PCR em plantas, mas sabe como é, gosto mais de ter informações de primeira mão, de alguém que já fiz. Abraços! Roberto
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23.12.2009(Qua)14:56 |
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Northon Bruno
Destaque
Registrado em: 03.11.2009(Ter)9:29 Mensagens: 646 Localização: Belo Horizonte
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hum entendi, como vc trabalha na area vc já conhece, mas eu não acho que e coisa fácil de se fazer não, como vc sabe tem que se conhecer a sequencia de DNA para que se faça um primer especifico par que vc possa comparar as variações genteticas das plantas... pq não faz logo um projeto de pesquisa e publica um artigo, pois o q vc quer fazer e algo para se publicar...
O Fernando (o resto é dificil de escrever) está pretendendo fazer o sequenciamento de DNA de uma especie que descobriu, sua chance
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24.12.2009(Qui)10:08 |
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RobertoR
Registrado em: 16.01.2009(Sex)22:12 Mensagens: 221 Localização: Curitiba (PR)
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Confie em mim, é fácil 
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24.12.2009(Qui)11:44 |
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Northon Bruno
Destaque
Registrado em: 03.11.2009(Ter)9:29 Mensagens: 646 Localização: Belo Horizonte
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quando fazia isso nós conheciamos a sequencia das bases nitrogenadas, para assim fazer um primer especifico para fazer a amplificação do DNA deste fragmento... como vc pretende amplificar o material genetico??? vc pretende fazer o q?? comparar os DNAs das diferentes plantas, ou vc quer sequenciar o DNA???
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24.12.2009(Qui)12:23 |
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fabriciopvet
Destaque
Registrado em: 02.07.2009(Qui)14:17 Mensagens: 221 Localização: Goiânia - Goiás - Brasil
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Gente saber a seqüencia é fácil. A maioria das plantas e animais já estao no projeto genoma, e ja tem varias partes de seu DNA sequenciadas. Vai no GENBANK, tem uma porrada de sequencias já, ai é só pegar a de um gene especifico e montar os primers.
Eu creio qu eo dificil é pra especies sem sequenciamento, porem com o rapd pcr se não me engano pode se saber a que "grupo" ou ate subgenero se for o caso, pertence as plantas.
E eu condordo com o colega acima, se vai fazer mesmo, faz um trem massa e publica, nem que seja um hobby cientifico , hehe
Abração
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24.12.2009(Qui)12:28 |
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RobertoR
Registrado em: 16.01.2009(Sex)22:12 Mensagens: 221 Localização: Curitiba (PR)
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Na verdade, a característica interessante da RAPD é que não precisa de conhecimentos prévios do código genético das espécies estudadas. Pela leitura do resultado em gel de agarose, você vé uma "digital" do código genético da planta, em princípio sem identificar seqüências específicas, mas podendo identificar similaridades e diferenças entre amostras. O "truque" é ter oligonucleotídeos que produzam um número de bandas suficiente para notar diferenças, mas não tão grande que o resultado seja não interpretável. Assim, a parte mais crítica do teste é a escolha dos oligonucleotídeos.
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24.12.2009(Qui)17:11 |
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Northon Bruno
Destaque
Registrado em: 03.11.2009(Ter)9:29 Mensagens: 646 Localização: Belo Horizonte
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e ai Roberto... revivendo o Tópico por curiosidade... quais foram os resultados que vc não nos disse??? Gosto tanto desta area da biologia... e por curiosidade queria saber os resultados...
_________________ Growlist
Fotos das minhas plantas
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25.07.2010(Dom)18:19 |
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