Introdução

Drosera intermedia é um tipo de planta carnívora presente principalmente no Brasil e na Austrália. Possui a produção de substância pegajosa como uma ferramenta para apreender suas presas.
Este estudo é o terceiro dos meus estudos em germinação in vitro, nos quais os experimentos 1 e 2 podem ser vistos no link a seguir:
http://www.plantascarnivorasbr.com/forum/viewtopic.php?f=11&t=8174
Este estudo foi motivado porque tenho visto em um fórum estrangeiro que o pessoal que realiza germinação in vitro costuma utilizar água oxigenada (H2O2), também conhecida como Peróxido de Hidrogênio em suas seqüências de esterilização.

Material & Métodos

Neste experimento tentei realizar a germinação in vitro de Drosera intermedia "Roraima". As sementes foram doadas pelo nobre colega Carlos Rohrbacher.
A inoculação das sementes no meio de cultura ocorreu dia 13.03.11
As sementes foram separadas em três lotes e colocadas em meio MS 1/3 de força, ou seja, 33%.
Cada lote refere-se a um tipo de método de esterilização:
lote 2´= Sementes esterelizadas em hipocplorito de sódio (água sanitária) Ipê a 10% por dois minutos. Este lote possuía 4 sementes por frasco, totalizando 36 sementes (9 frascos).
lote 12´= Sementes esterelizadas em hipocplorito de sódio Ipê a 10% por dois minutos e depois por mais dez minutos. Este lote possuía 10 sementes por frasco (7 frascos), totalizando 60 sementes.
lote H2O2= Sementes esterelizadas em hipocplorito de sódio Ipê a 10% por dois minutos e depois por mais dez minutos e finalmente com água oxigenada 10 volumes diluída 40% por cinco minutos. Este lote possuía 10 sementes por frasco, totalizando 60 sementes.

Resultados & Discussão

teste de descontaminação:
Foi verificada contaminação das sementes conforme descrito a seguir:
lote 2´= 4 frascos com uma semente contaminada em 19.03.11
lote 12´= 1 frasco com uma semente contaminada em 27.03.11
lote H2O2= nenhuma semente contaminada até o momento
Conforme observado é possível constatar que é melhor deixar 12 minutos para que o hipoclorito possa agir e mesmo assim foi possível verificar que uma semente ainda contaminou-se das 60 inoculadas, sendo que apenas o tratamento com a finalização com água oxigenada levou ausência completa de contaminação. A contaminação no lote que ficou mais tempo em hipoclorito também demorou uma semana a mais para ser percebida. Apesar de não ter sido feita análise estatística tudo indica que a melhor maneira de desciontaminar sementes de Drosera intermedia "Roraima" é o que foi realizado no lote H2O2 que obteve ausência de contaminação.

teste de germinação:
Foi observada germinação em meio de cultura no dia 27.03.11, ou seja, pouco mais de 3 semanas após a inoculação das sementes.
a germinação foi verificada diferencialmente entre os meios conforme descrito a seguir:
lote 2´= não houve ainda germinação evidente dentre os frascos restantes ( 4 frascos não contaminados).
lote 12´= de 60 sementes restantes (6 frascos não contaminados) foram verificadas duas germinações, o que gera uma taxa de 3,3% de germinação.
lote H2O2= de 60 sementes foram verificadas oito germinações, o que gera uma taxa de 13,3% de germinação.
Podemos observar que o tratamento com água oxigenada, apesar de não ter sdo feita a análise estatística, demonstrou uma taxa de germinação quatro vezes maior que o lote 12´que pode servir como grupo controle deste tratamento. O que nos leva a crer que o tratamento com água oxigenada realmente possui um efeito benéfico na germinação.
Li alguns tópicos nos quais dizem que água oxigenada é maléfica às plantas carnívoras, mas, quando se trata em relação às sementes isto parece não ser necessariamente correto, mas, estudos com sementes de outras espécies devem ser feitos para uma generalização.
Outros experiementos com outras concentrações de água oxigenada e tempo de exposição devem ser realizados para concluirmos se este efeito pode ainda ser melhorado, já que 13,3% de germinação é muito pouco.
Caso as sementes continuem a germinar eu vou editando o tópico e informando aos colegas.
Outra tendência a se observar é que a esterilização com apenas dois minutos de hipoclorito a 10% por 10 minutos não levou a uma maior taxa de germinação, ao contrário, ainda não houve germinação neste grupo, a pesar que constava de menor número de sementes. Fiquei um pouco impressionado com este dado, pois, imaginava que como ocorre para orquídeas quanto maior o tempo de exposição à água sanitária maior seria a taxa de insucesso da germinação, mas, o que observei foi exatamente o contrário.
Não sei explicar o porque a água oxigenada determinou este efeito e inclusive gostaria até de ouvir opiniões dos colegas sobre o assunto. Será que alguém tem idéia?
O fato é que apesar deste experimento ter sido feito in vitro é possível que o tratamento com água oxigenada possa melhorar o rendimento de germinações de Drosera intermedia "Roraima" também ex-vitro, ou seja, em musgo ou outro substrato que vocês utilizem.
Existem algum tópico sobre o benefício da água oxigenada na germinação de sementes neste fórum?
Seria interessante ainda estudar o papel dos radicais livres no ambiente das plantas carnívoras em relação à taxa de germinação, já que a água oxigenada levou a um grau maior de germinação. Alguém sabe se a população natural de D. intermedia vive em ambientes com altas taxas de radicais livres?
É interessante pensar na relação entre a presença de radicais livres como o Peroxido de Hidrogênio e as substâncias anticarcinogênicas (anticancerígenas) que foram descobertas para as carnívoras. ver no tópico:
http://www.plantascarnivorasbr.com/forum/viewtopic.php?f=10&t=8106
Como os colegas citaram que plantas carnívoras não gostam de água oxigenada, pode ser que produzam estas substâncias como meio de se protegerem contra os radicais livres que encontram em seu habitat natural...
Estou muito animado com estes pequenos estudos que venho fazendo e estou pensando até mesmo em publicá-los futuramento num congressinho, mas, vocês são os primeiros a poderem ver estes resultados preliminares.
Muito apaixonante estas plantinhas!

Agradecimentos:
Agradeço imensamente ao colega Carlos Rhorbacher por ter me doado estas sementes e um pouco de seu conhecimento, sem ele este estudo seria mais difícil!
Agradeço ainda aos colegas do fórum que sempre vem incrementando meus parcos conhecimentos sobre estas plantinhas.

Abraço a todos os colegas

Cleber

Interessante, Cleber!

Vou acompanhar seu experimento e torço para que a H2o2 produza o efeito esperado.

Boa sorte e nos mantenha informados dos seu progresso.

Parabém pela sua iniciativa e obrigado por compartilhar.

Muito bom isso que você está fazendo...
Acho que esse site pode te ajudar:
http://members.cox.net/lmlauman/osp/html/hyponex.html

Olá Cleber,

as informações são muito interessantes, eu fiquei muito interessado no modo
como você as esteriliza, quando puder fazer um tutorial eu lhe seria grato.
Penso em esterilizar o musgo para as germinações pois geralmente algas e
fungos 'comem' parte das minhas sementes.

Um abraço.

obrigado Nildo pelo site!

Carlos, eu estava pensando aqui com meus botões e para vocês que utilizam sphagnum poderiam pegar este sphagnum já lavado e na umidade adequada para o cultivo colocar dentro de um frasco de maionese tampado bem frouxamente e ferver em panela de pressão por 15 minutos.
Providencie outro frasco de maionese com água pela metade dentro e faça o mesmo procedimento que o frasco anterior. Deixa esfriar e providencie:

esterilização das sementes:
*num copo: pegar água sanitária e 10mL e completar com 90 mL de água comum para ficar um total de 100mL.
*noutro copo: pegar 40mL de água oxigenada 10volumes e completar com 60mL de água comum para ficar um total de 100mL.
*pegar as sementes e colocar dentro de papel de filtro de café bem dobradinho e prender este papel dobrado com clipe de papel.
*
procedimento:
pegar este saquinho de papel com as sementes dentro e colocar na solução de água sanitária diluída por 10 minutos.
tirar o saquinho e colocar na solução de água oxigenada diluída por 5 minutos.
tirar o saquinho e colocar dentro do frasco com água (fria) que foi fervida na panela de pressão, tampar, apertar a tampa e mexer bem para tirar bem a água oxigenada.
sem possibilitar que o sphagnum ou as sementes tenham contato com o ar (seria bom ter uma capela de fluxo laminar), mas, existe maneira caseira de fazer isso...Acho que já vi um post por aqui que mostra como...De qualquer maneira as vezes a pessoa dá sorte de colocar a semente dentro do frasco e sem respirar dentro e sem ter vento no local por as sementes sobre o sphagnum e não contaminá-las. Daí fechar o pote, mas, sempre deixando a tampinha bem frouxa para poder entrar ar.

O importante é que o sphagnum fica esterilizado na panela de pressão e a água também, as sementes são esterelizadas na água sanitária e na água oxigenada. Tá tudo esterilizado. Se você permitir que a semente ou o sphagnum entrem em contato com bactérias, fungos ou esporos de algum dos dois, daí estes irão crescer e cobrir as sementes o que pode matá-las.
Detalhe:
Eu nunca fiz estas coisas aí que eu descrevi. Disso daí a única coisa que eu fiz foi esterelizar sementes e mesmo assim você pode ver que por meio de meus experimentos as vezes eu tenho contaminação mesmo com todo esse cuidado.
Espero ter respondido.
abraço!

Olá Cleber,

foi muito esclarecedor. Estava aqui olhando para a minha esposa e
acho vou ter que negociar essa história de panela de pressão.
Eu já escaldei o sphagnum muitas vezes para que a sujeira se desprendesse
mais facilmente (sim, o sphagnum pode ser muito sujo), fervi a água em uma
panela comum e depois lancei sobre o sphagnum. Outro método foi colocar o
sphagnum hidratado em um refratário coberto com filme PVC dentro do
microondas por dez minutos. O meu problema é que na ausência de um tipo de
fungo (do sphagnum sujo) aparece outro (do sphagnum limpo), mas claro que
não cheguei nem perto dos cuidados que você descreveu.
Tenho sementes de sarracenias para retirar da estratificação, vou fazer dois
grupos, um controle e outro experimental com esse teu método. Depois conto
os resultados.

Um abraço.

Legal Carlos! Vou ficar esperando pra saber o resultado!
Se der certo vou ficar bem contente!
Boa sorte aí!

Cleber, para fazer a micropropagação precisa do ágar?
ou a micropropagação pode ser feita sem esse tipo de materia?

Te desejo sorte na semeadura das Sarracenias, Carlos.

Olá Nildo!
Historicamente para a germinação de plantas in vitro tem sido utilizado o ágar-ágar como gelificante. É um material que não é caro, porque é usado em culinária, mas, muitos lugares usam outros gelificantes como gelrite (goma gelana), phitagel, e etc. Até hoje eu spo usei o ágar-ágar.
Alguns trabalhos têm tentado utilizar fibras como a de bagaço de cana como substrato para trabalho in vitro e têm conseguido resultados para as plantas testadas. Desta forma, é possível inovar. Tudo é questão de ir experimentando.
Um abraço.
Cleber