Roberto,

eu já fiz um mini curso de propagaçao in vitro na minha universaidade, e já fiz algumas experiencias aqui. Cara nunca, mas nunca deixe os frascos abertos! O meio de cultura é otimo pras plantas, mas tambem pra fungos e bacterias. em casa e ate em laboratorio o mais complicado é a não contaminação. A estapa de esterilização é a parte mais sussegada. A manipulaçao, colocar os tecidos nos frascos, mudar plantula de frasco.. é o pior! se não tomar cuidado tu perde tupo por contaminação.

Quantos a luz, existem algumas lampadas no mercado pra horticultura e aquarios, como as grouloux, aquastar e as novas e revolucionarias T5 que ja li que sao usadas em camaras de crescimento.


realmente eu acho que a assepsia e a correta manipulaçao principalmente em casa, sem camara de fluxo , é a chave do sucesso.


vai postando ai as novidades..

abração

Obrigado Fabrício! No caminho irei te pedir algumas dicas então! :D
Abraços!
Roberto

Achados interessantes

1) O leite de coco contém zeatina riboside, hormónio com atividade citoquinina-símile que favoresce o crescimento dos tecidos (aqui, pág. 5) e pode ser usado em 10-15% no meio de cultivo (pág. 38; a preparação de leite de coco para cultivo é à pág. 44). Agora entendo porque alguns sites aconselham o uso de leite de coco nos meios de cultivo!
2) A zeatina, a piridoxina (B6), agüentam a esterilização. A tiamina também, mas em pH 5,5 - se o pH for mais alto, não resiste. (pág. 28). O pantotenato (B5) é destruido pelo calor, mas é menos importante.
3) O filme de polipropileno é impermeável à água, mas é permeável ao ar, assim, é um bom material para selagem de culturas (pág. 31). Pode ser interessante encontrar tampas em polipropileno (PP, não PET) para uso em frascos de cultivo.

Roberto,

Se tem muitos protocolos usando leite de coco e banana verde. Até mesmo protocolos profissionais usados em laboratorios.

O ideal pra ph, segundo literatura é 5,4 á 5,8.

Se não me engano não só a zeatina como todas as citoquioninas e auxinas consseguem aguentar os processos de autoclavagem, se não me engano somente as giberilinas não aguentam.

Filme de propileno é show! já tem uns rolos esterelizados, mas é um saco de pegar as manhas hehehe, enrrola muito, embaraça... mas é uma mao na roda, quando pega a mão. Ajuda muito a reter agua no meio, e fazer uma pequena troca gasosa, mas oh, não é lá essas coisas não... tem muitos trabalhos, ressaltando alguns produtos volateis oriundos da degradaçao de nutrientes pelas plantas, e o maleficio que causam nos explantes. Por isso o idealé a cada 20 a 35 dias trocar os explantes de meio. Muitos já utilizam potem quadrados ou retangulares com tampa propria, pr anao precisar usar filme e pela facilidade de manusear pote com tampa.


E o seu teste, como está saindo?

O meu deve sair no inicio de janeiro.. vamos ver no que dá.

Olá Fabrício! Obrigado! Então você está cultivando in vitro bem neste momento! :D
Já vou alterar o pH aconselhado lá na tabela!

Saberia me dar alguma dica sobre onde encontrar filme de propileno?

Quando você fala que muitos utilizam potes quadrados com tampa própria... são específicos para isto, ou são de tipo "comum"?

Abraços!

Roberto

Oi Roberto,
Muito interessante os trabalhos de voces.
Desculpe não poder responder antes pois para escrever aqui precisava de tempo.
Vou escrever aqui como era feita a minha propagação in vitro das Dionaeas, Cephalotus e Nepenthes.
O mais importante é o meio de cultura que deve ser eficaz e barata.
O meio mais simples que consegui com sucesso é
1 litro de agua ( torneira mesmo)
12 g de agar-agar encontrado nas lojas koreanas
30g de açucar cristal ( mais barato e sem iodo)
100 ml de agua de coco verde ( no ceasa custa 80 centavos de reais cada) . O excesso deve ser armazenado no frizer. Serve como hormonio enraizador e de perfilhamento.
3g de adubo HYPONEX de cor verde( importado dos USA)
Não precisa ajustar o pH pois o meio fica acido naturalmente.
Usar uma panela de pressão e cronometrar 10 minutos apos a emição de vapor ( 110°C / 1.5 atm / por 10 minutos)
Usei vidros de maionese com tampas de plástico.
Adicionava mais ou menos 30 ml do meio em cada vidro e esta quantidade pode manter a planta dentro por um ano.

Inoculei sementes apenas por isso não sei como esterilizar partes das plantas. No caso das sementes é só usar candida a 12% e miisturar as sementes por 10 a 20 minutos.
O tempo de misturar e a porcentagem da candida devem ser testadas . Quanto mais fraca a semente como as das Nepenthes, devemos diminuir a concentração e aumentar o tempo de esterilização.
A luz que usamos era artificial comum( fluorescente) pois depois de alguns testes a Growlux não nos mostrou nenhum efeito positivo.
No caso de Dionaea, deve se usar 3 lampadas fluorescentes a 20 cm do vidro para ter um bom crescimento da muda.
A camara de fluxo laminar é o segredo do sucesso!
Eu comprei um aparelho que custou apenas 100 dolares que filtra o ar e esteriliza. Com este aparelho posso trabalhar melhor dentro da caixa.
Não sei se esqueci alguma coisa mas aqui está o método mais simples de fazer TC.
Abraços a todos.

ps: pode se fazer um meio sem o agar-agar mas precisa de um aparelho que fique agitando o frasco sem parar ou um filtro de papel no meio para que o liquido nutritivo chegue até a semente ou muda.

Marcos obrigado por compartilhar aqui sua tecnica.

Realmente o segredo 'e a esterilizacao!
eu estou sofrendo um bocado aqui aqui pra não contaminar os meios.. mas sem uma camara ta dificil pra caramba!

O sistema de meio liquido 'e muito complicado.. eu ja vi uns sistemas.. tem que ter varias garrafas conectadas, com circulacao do meio etc, e agitacao , ele não pode ficar parado... realmente 'e o mlehor esquema de propagacao, porem, 'e dificil e caro de montar.

Abracao

Obrigado Marcos!!! Vou aplicar seus conselhos, só espero conseguir o Hyponex.
No meu caso não tenho contaminação, porém nenhuma das sementes germinou até agora (e já fazem 2 meses).
Grandes abraços!!
Roberto

Alguma atualização ?
As sementes germinaram ?

Olá Zemeczak! Negativo, estão lá, não contaminaram, mas até agora não germinou nada - possivelmente matei tudo na esterilização

Vou tentar de novo, mas quer comprar mesmo um pouco de meio MS para comparar.